CerTest SARS-CoV-2 Экспресс-тест
CERTEST SARS-CoV-2
НАЗНАЧЕНИЕ
CerTest SARS-CoV-2 одностадийный карточный тест - это цветной хроматографический иммуноанализ для качественного определения нуклеопротеинового антигена SARS-CoV-2 в образцах мазков из носоглотки от пациентов с подозрением на инфекцию COVID-19.
Карточный тест CerTest SARS-CoV-2 предлагает простой и высокочувствительный скрининговый анализ в качестве помощи в диагностике инфекции SARS-CoV-2…
ВВЕДЕНИЕ
Невидимая пневмония быстро распространилась в Ухане, Китай, в декабре 2019 года. Ученые секвенировали и распознали новый β-коронавирус.
Заболевание, вызванное вирусом короны 2 тяжелого острого респираторного синдрома (SARS -CoV-2), называется коронавирусной болезнью 2019.
(COVID-19).
Коронавирусы (CoV) - это РНК, покрытые оболочкой вирусы с большим геномом (29,9 т.п.н.), среди которых β-CoV и α-CoV могут инфицировать млекопитающих.
Вирусы, принадлежащие к семейству Coronaviridae, имеют самый распространенный мембранный белок (M) среди других белков, то есть гликопротеин шипа (S), белок нуклеокапсида (N) и белок оболочки (E). Спайковый гликопротеин (S) является одной из мишеней Т-клеточного ответа в иммунной системе. Белок S также способствует связыванию оболочки вируса с рецептором ACE2 и проникновению вируса в клетку-мишень. Рецепторы ACE2 присутствуют в клетках артерий, вен, гладкой мускулатуры, тонкой кишки, альвеолах легких, волосяных фолликулах, сердечных миофибробластах, коже, головном мозге и почках, поэтому SARS-CoV-2 потенциально может инфицировать эти ткани.
Клинические формы этого заболевания включают от легких до очень тяжелых симптомов: пневмония, лихорадка и респираторные симптомы являются наиболее частыми. Другие симптомы вирусной инфекции включают боль в горле, ломоту, боль и одышку. В некоторых случаях также наблюдаются насморк, тошнота и диарея.
Вспышка недавно обнаруженного коронавируса начинается в основном через выделения из носа или капель слюны, когда инфицированный человек чихает или кашляет, а предполагаемое время инкубации составляет 2 недели. В связи с высокой частотой инфицирования SARS-CoV-2 выявление бессимптомно-положительных пациентов, вероятно, является одним из ключевых моментов в борьбе со вспышкой.
ПРИНЦИП ИСПЫТАНИЯ
CerTest SARS-CoV-2 основан на принципе качественного иммунохроматографического анализа для качественного обнаружения SARS-CoV-2 в образцах мазков из носоглотки от пациентов с подозрением на инфекцию COVID-19.
Полоска состоит из нитроцеллюлозной мембраны, предварительно покрытой мышиными моноклональными антителами на тестовой линии (T) в окне результатов против SARS-CoV-2 и с кроличьими поликлональными антителами на контрольной линии (C) против специфической белок. На впитывающую подушечку метки / образца распыляют раствор тестовой метки (мышиные моноклональные антитела против SARS-CoV-2), конъюгированный с красным латексом полистирола, и раствор контрольной метки (специфический связывающий белок), конъюгированный с зеленым латексом полистирола, с образованием окрашенных комплексов конъюгата. Если образец положительный, антигены разбавленного образца реагируют с комплексом конъюгата красного цвета (моноклональные антитела против SARS-CoV-2 - красные полистирольные микросферы), который предварительно был предварительно высушен на впитывающей подушке. Затем смесь перемещается вверх по мембране за счет капиллярного действия. По мере прохождения образца через тестовую мембрану связывающие конъюгированные комплексы мигрируют. Антитела против SARS-CoV2, присутствующие на мембране (тестовая линия), захватывают цветной конъюгат, и красная линия будет видна. Эта полоса используется для интерпретаци результата.
Если образец отрицательный, антигены SARS-CoV-2 отсутствуют, и тем не менее, антигены могут присутствовать в концентрации ниже, чем значение предела обнаружения, при котором реакция не будет происходить с комплексом конъюгата красного цвета. Антитела против SARS-CoV-2, присутствующие на мембране (тестовая линия), не будут захватывать комплекс конъюгата антиген-красный (не образуется), для которого красная линия не будет появлятся.
Независимо от того, является ли образец положительным или нет, смесь продолжает перемещаться через мембрану к иммобилизованным специфическим антителам, помещенным в контрольную линию. Антиспецифические белковые антитела, присутствующие на мембране, будут захватывать контрольный комплекс конъюгат зеленый, и контрольная линия всегда будет появляться. Наличие этой зеленой линии служит: 1) проверкой того, что добавлен достаточный объем, 2) получен правильный поток и 3) внутренним контролем реагентов.
ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ
Хранить в закрытом виде при 2-30ºC. Тест стабилен до истечения срока годности, указанного на запечатанном пакете. До использования тест должен оставаться в запечатанном пакете. Не замораживать.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
- Для профессиональной диагностики in vitro.
- Не использовать по истечении срока годности. - Все образцы следует рассматривать как потенциально опасные, и с ними следует обращаться так же, как с инфекционными агентами. Для каждого образца необходимо использовать новый тест, чтобы избежать ошибок загрязнения. Помните, что заражение COVID-19 очень опасно.
- После тестирования тесты следует выбросить в соответствующий контейнер для биологически опасных материалов.
- Реагенты содержат консерванты. Избегайте контакта с кожей или слизистыми оболочками. См. Паспорт безопасности, доступный по запросу.
- Компоненты, входящие в комплект, одобрены для использования в тесте CerTest SARS-CoV-2. Не используйте какие-либо другие компоненты коммерческого набора.
- Наличие желтых линий в окне результатов (зона контрольной линии и зона тестовой линии) перед использованием теста является полностью нормальным и не означает отказа функциональности теста.
- Соблюдайте надлежащую лабораторную практику, носите защитную одежду, используйте перчатки, защитные очки и маску. Не ешьте, не пейте и не курите на рабочем месте.
- Все положительные результаты должны обрабатываться в соответствии с местными законами и правилами.
ЗАБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ
Образцы следует обработать как можно скорее после сбора. Если это невозможно, образцы можно хранить в холодильнике (2-8 ºC) в течение 8 часов перед тестированием.
Подготовка образца (см. Иллюстрацию): Метод мазка из носоглотки:
1. Выньте тампон из упаковки.
2. Взять образец стерильным тампоном из одной ноздри.
3. Вставьте тампон через ноздрю в носоглотку, вращая его относительно стенки носа (чтобы убедиться, что тампон содержит клетки, а также слизь).
4. Повторите процедуру, используя другую ноздрю.
5. Обработайте тампон как можно скорее после взятия пробы.
Сбор образцов
МАТЕРИАЛЫ
ПРЕДОСТАВЛЯЕМЫЕ МАТЕРИАЛЫ
- Тесты карт CerTest SARS-CoV-2
- Реагент SARS-CoV-2 (разбавитель образца)
- тампоны
- Одноразовые пипетки
- Пробирки
- Инструкции по применению
- Лабораторный штатив
- мазок для положительного контроля CerTest SARS-CoV-2 +
Инструкция по применению
НЕОБХОДИМЫЕ, НО НЕ ПРЕДОСТАВЛЯЕМЫЕ МАТЕРИАЛЫ
- Контейнер для сбора образцов
- Одноразовые перчатки
- Таймер
ТЕСТОВАЯ ПРОЦЕДУРА
Перед тестированием дайте тестам, образцам и контролям достичь комнатной температуры (15-30ºC). Не открывайте пакеты до выполнения
проба. - Процедура A с использованием мазков из носа: 1. Добавьте 15 капель (примерно 500 мкл) (1) реагента SARS-CoV-2 и немедленно поместите тампон в пробирку. 2. Перемешайте раствор, с силой вращая тампон против стенок пробирки не менее 1 минуты. Наилучшие результаты достигаются, когда образец интенсивно экстрагируется в растворе (2). Извлеките из тампона как можно больше жидкости, сжимая стенки пробирки или поворачивая тампон против стенок при извлечении тампона. Выбросьте тампон. 3. Извлеките тест-карту CerTest SARS-CoV-2 из запечатанного пакета непосредственно перед ее использованием. 4. Используйте отдельную пипетку и исследуйте каждый образец или контроль. Выдавите ровно 3 капли (примерно 120 мкл) из пробирки в круглое окошко, помеченное буквой S (3). 5. Прочтите результаты через 10 минут. Не читайте результат теста позже 10 минут.
Если тест не выполняется из-за типа образца, перемешайте образец, добавленный в окно для образца (S) с помощью пипетки. Если это не сработает, выдавите каплю реагента SARS-CoV-2 до тех пор, пока не увидите жидкость, протекающую через зону реакции.
|
|
Окно результатов (A/B/C/D) Строка управления (C) Тестовая линия (T) Образец (S) круглых окон (A / B / C / D) |
Добавьте 20 капель реагента SARS-CoV-2 |
Поместите тампон в пробирку, вращая 1 минуту, и извлеките жидкость. |
Добавьте 3 капли в круглое окно (S)
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ (см. Рисунок ниже)
|
1.ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ |
2.ПОЗИТИВНО |
3.НЕДЕЙСТВИТЕЛЬНО |
4.ИНВАЛИД |
|
|
SARS-CoV-2 |
Интерпретация результатов |
|
1 |
- |
В образце нет антигена SARS-CoV-2. |
|
2 |
+ |
В образце присутствует антиген SARS-CoV-2. |
|
3 |
Любой другой результат |
Недействительный результат, мы рекомендуем повторить анализ, используя тот же образец с другим тестом. |
ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ: только одна ЗЕЛЕНАЯ линия появляется в окне результатов на сайте, отмеченном буквой C (контрольная линия).
ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ: В дополнение к ЗЕЛЕНОЙ контрольной линии, КРАСНАЯ линия также появляется на участке, отмеченном буквой T (тестовая линия) в окне результатов.
НЕДЕЙСТВИТЕЛЬНО: полное отсутствие контрольной цветной линии (ЗЕЛЕНОЙ) независимо от внешнего вида тестовой линии (КРАСНАЯ). Недостаточный объем образца, неправильные методики проведения анализа или порча реагентов в большинстве случаев являются основными причинами отказа линии управления. Просмотрите процедуру и повторите анализ с новым тестом. Если симптомы или ситуация не исчезнут, прекратите использование тестового набора и обратитесь в местном распределителям.
ПРИМЕЧАНИЯ ПО ИНТЕРПРЕТАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ
Интенсивность красной полосы в тестовой линии (T) в окне результатов будет варьироваться в зависимости от концентрации антигена, присутствующего в образце. Однако с помощью этого качественного теста невозможно определить ни количественное значение, ни скорость увеличения антигена.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
В тест включен внутренний процедурный контроль. Зеленая линия, появляющаяся в контрольной линии (C) в окне результатов, является внутренним контролем, который подтверждает достаточный объем образца и правильную методику процедуры.
ОГРАНИЧЕНИЯ
1. Тест необходимо провести в течение 2 часов после открытия запечатанного пакета.
2. CerTest SARS-CoV-2 следует использовать только с образцами мазков из носоглотки. Использование образцов мазков, взятых из других мест, или использование других образцов, таких как слюна, мокрота или моча, не установлено. Качество теста зависит от качества пробы; необходимо получить надлежащие образцы из носоглотки.
3. Интенсивность тестовой линии может варьироваться от очень сильной при высокой концентрации антигенов до слабой, когда концентрация антигенов близка к значению предела обнаружения теста.
4. Положительные результаты определяют наличие антигенов SARS-CoV-2. Диагноз инфекции SARS-CoV-2 должен быть поставлен врачом только после оценки всех клинических и лабораторных результатов и должен основываться на корреляции результатов с дальнейшими клиническими данными.
5. Отрицательный результат не имеет значения, так как концентрация антигенов в образцах носоглотки может быть ниже предела обнаружения. Если симптомы или ситуация не исчезнут, рекомендуется, чтобы все отрицательные результаты прошли подтверждающее тестирование с использованием другого метода и / или идентификацию вируса с помощью клеточной культуры или ПЦР. 6. CerTest SARS-CoV-2 обнаруживает нуклеопротеиновый антиген SARS-CoV-2 и SARS.
ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
30 января 2020 года Всемирная организация здравоохранения объявила COVID-19 чрезвычайной ситуацией в области общественного здравоохранения, имеющей международное значение. С начала пандемии SARS-CoV-2 поразил миллионы людей, унеся тысячи жертв по всему миру. Недавние исследования показали, что первичная вирусная инфекция, обнаруженная у пациентов с симптомами, идентична таковой у бессимптомных пациентов, что позволяет предположить, что пациенты с COVID-19 с бессимптомными инфекциями способны передавать SARS-CoV-2. Во время инкубационного периода бессимптомные пациенты также могут передавать вирус здоровым людям.
Хотя инфекция SARS-CoV-2 может поражать людей любого возраста, дети и пожилые люди, страдающие астмой, относятся к более высокой категории риска заболевания.
Сообщается, что у людей с основными проблемами со здоровьем, такими как рак, хронические респираторные заболевания, сердечно-сосудистые заболевания и диабет, выше вероятность развития серьезных заболеваний.
РАБОЧИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Клиническая чувствительность и специфичность. Оценка с использованием образцов из носоглотки проводилась в соответствии с критериями оценки. Критерии оценки состоят в следующем: сравнивались два экспресс-теста (CerTest SARS-CoV-2, Certest) с другими коммерчески доступными экспресс-тестами от конкурентов, противоречивые результаты были подтверждены методом qPCR. Результаты были следующими:
|
|
|
Критерии оценки |
||
|
Тест IC: CerTest SARS-CoV-2. |
|
+ |
- |
Общее |
|
+ |
69 |
1 |
70 |
|
|
- |
5 |
47 |
52 |
|
|
Общее |
74 |
48 |
122 |
|
|
CerTest SARS-CoV-2 и критерии оценки |
||
|
|
Среднее значение |
95% доверительный интервал |
|
Чувствительность |
93,2% |
84,9-97,8% |
|
Специфика |
97,9% |
88,9%-99,9% |
|
PPV |
98,6% |
92,3-100,0% |
|
NPV |
90,4% |
79,0-96,8% |
Оценка с использованием образцов из носоглотки была проведена путем сравнения результатов, полученных с помощью иммунохроматографического теста (CerTest SARS-CoV-2, Certest), с методом qPCR. Результаты были следующими:
|
|
|
метод qPCR |
||
|
Тест IC: CerTest SARS-CoV-2. |
|
+ |
- |
Общее |
|
+ |
110 |
1 |
110 |
|
|
- |
42 |
61 |
103 |
|
|
Общее |
152 |
62 |
214 |
|
|
CerTest SARS-CoV-2 и метод количественной ПЦР |
||
|
|
Среднее значение |
95% доверительный интервал |
|
Чувствительность |
72,4% |
64,5-79,3% |
|
Специфика |
98,4% |
91,3-100,0% |
|
PPV |
99,1% |
95,1-100,0% |
|
NPV |
59,2% |
49,1-68,8% |
Другая оценка, с использованием образцов из носоглотки, проводилась путем сравнения результатов, полученных с помощью иммунохроматографического теста (CerTest SARS-CoV-2, Certest), с методом qPCR. Результаты были следующими:
|
|
|
метод qPCR |
||
|
Тест IC: CerTest SARS-CoV-2. |
|
+ |
- |
Общее |
|
+ |
29 |
1 |
30 |
|
|
- |
12 |
61 |
73 |
|
|
Общее |
41 |
62 |
103 |
|
|
CerTest SARS-CoV-2 и метод количественной ПЦР |
||
|
|
Среднее значение |
95% доверительный интервал |
|
Чувствительность (Ct≤25) |
96,0% |
79,6-99,9% |
|
Чувствительность (Ct≤30) |
90,0% |
73,5-97,9% |
|
Чувствительность |
70,7% |
54,5-83,9% |
|
Специфика |
98,4% |
91,3-100,0% |
|
PPV |
96,7% |
82,8-99,9% |
|
NPV |
83,6% |
70,3-91,2% |
Результаты показали высокую чувствительность и специфичность для обнаружения SARS-CoV-2 с помощью CerTest SARS-CoV-2.
Перекрестная реактивность
Была проведена оценка для определения перекрестной реактивности CerTest SARS-CoV-2 .; отсутствие перекрестной реактивности против организмов, патогенов, других организмов, веществ, которые могут вызвать инфекции:
CerTest SARS-CoV-2 показал слабую реакцию на MERS.
